CONTROL DE CALIDAD DE LA METODOLOGÍA ANALÍTICA

Al realizar un análisis en el laboratorio se producen errores que afectan a la exactitud y a la precisión de los resultados, y estos errores pueden ser de dos tipos: aleatorios o sistemáticos.

ERRORES ALEATORIOS

Los errores aleatorios afectan a la precisión de los resultados y no se pueden evitar, solo se pueden evaluar estimando la precisión del procedimiento analítico y minimizar si se mejora esta precisión.

La precisión de un método analítico se determina realizando un número determinado de replicas del analito en una disolución patrón o de una muestra.

La precisión es el grado de concordancia entre un grupo de resultados obtenidos al aplicar repetida e independientemente la misma metodología analítica a alícuotas de la misma muestra. Se dice entonces que un resultado es preciso si no presenta errores aleatorios o al menos si estos errores son aceptables.

ERRORES SISTEMÁTICOS

Los errores sistemáticos afectan a la exactitud de los resultados y se pueden detectar evaluando la exactitud del procedimiento analítico.

La exactitud de un método analítico se puede evaluar de varias formas:

a) Utilizando materiales de referencia certificados.

b) Utilizando métodos de referencia establecidos por distintos organismos oficiales.

c) Preparando una muestra sintética de referencia en el laboratorio que contenga una matriz similar a la muestra que se quiere analizar.

d) Realizando ejercicios de intercomparación entre laboratorios.

La exactitud es la proximidad en la concordancia entre un resultado y el valor de referencia aceptado. Se dice entonces que un resultado es exacto si no presenta errores sistemáticos o al menos si estos errores son aceptables. Hablaremos de materiales y métodos de referencia.

EXACTITUD

Los materiales y métodos de referencia empleados para la determinación de PAHs en moluscos y peces, han sido extraídos de la tesis del señor José Antonio Soriano Sanz, centrada en el estudio de los citados hidrocarburos en mejillones de la costa de Galicia.

Hay dos técnicas que se suelen utilizar en la detección de PAHs: la cromatografía de gases con detección por espectrofotometría de masas y la cromatografía de líquidos de alta eficacia con detección por espectrofotometría ultravioleta o por fluorescencia. Estos son los métodos oficiales 8100 y 8310 para el análisis de PAHs en el medio ambiente propuestos por la EPA.

El segundo método es más rápido y permite obtener una mejor selectividad para la preparación de isómeros que no se pueden separar por cromatografía de gases. Sin embargo la cromatografía de gases es más eficaz.

Además de éstas, también se utilizan: la espectrofluorometría sincrónica para PAHs fluorescentes y la cromatografía de fluidos supercríticos con detectores compatibles con GC y HPLC.

Los aparatos que se emplean habitualmente para este tipo de estudios, son:

· Liofilizador, Telstar, Terrassa-España.

· Rotavapor Büchi.

· Rotavapor Buchi 490.

· Baño termostatizado de agua.

En cuanto a los instrumentos, detacamos:

· Balanzas analíticas de precisión.

· Cromatógrafo de Líquidos de Alta Eficacia. Equipado con desgasificador de vacío que evacue los gases disueltos a través de tubos semipermeables especiales, proporcionando unos niveles constantes de aire cercanos a 0. La bomba cuaternaria consigue un flujo estable de disolventes y virtualmente libre de pulsos y con alta eficacia de mezcla. El inyector automático tiene un rango de volúmenes de inyección que abarca de 0.1 a 100 μl. Se suelen emplear en estos casos, volúmenes de inyección de 20μl. Además, debe empelarse un compartimento termostatizado de columnas con efecto Peltier, y detector de diodos. El cromatográfo está equipado con el software HP Chemstation bajo un sistema operativo Windows NT y columna cromatográfica.

· Detector de fluorescencia de longitud de onda programable que perminte variar longitud de onda de excitación y emisión a lo largo del tiempo de elución de los diferentes compuestos, de modo que en el momento en que eluye cada uno de ellos el detector tiene las longitudes de onda que permiten su cuantificación óptima.

PRECISIÓN

Como ya se ha dicho la precisión sirve para comparar cómo de semejantes son los resultados obtenidos exactamente de la misma manera.
Es un método de calidad del método analítico.
El cálculo de la precisión debe ir acompañada de la descripción completa de la experimentación desarrollada: es importante conocer los aparatos, reactivos… Además es muy importante una correcta calibración de los instrumentos de medida.
Antes de ello, se debe determinar distintos parámetros: como son los patrones a utilizar o su disponibilidad en el mercado…
Cuanto más diferentes sean las condiciones experimentales, mayor será la variabilidad y mayor la precisión.
Para el estudio de la precisión, debemos tener en cuenta dos conceptos:
_Repetitividad: es la dispersión de resultados de ensayos mutuamente independientes, usando el mismo método, en el mismo laboratorio , por el mismo operador , usando el mismo equipamiento, en un intervalo corto de tiempo. Ello es un reflejo de la varianza.
_Reproductividad: se define como las distintas extracciones de un material de referencia, usando antes un ejercicio de intercalibración.



Un plan de trabajo para conseguir una correcta precisión en la determinación de PAHs en peces y moluscos, requiere un procedimiento específico.

Comienza ya con la obtención de las muestras, en donde será necesario tener en cuenta unos

factores concretos:

Es importante que la recolección de muestras se haga en el mismo lugar y en un periodo de tiempo lo más breve posible. Hay que tener en cuenta la época de extracción y la concentración y evolución temporal de los contaminantes, en base a agentes como por ejemplo las mareas rojas. En caso de algunos moluscos, tales como el mejillón, la obtención se hará sólo durante marea baja.
También será necesario que exista amplia variabilidad de tallas en los individuos. Se recogerán unos 50 individuos.



Después de la extracción, se transportarán refrigerados al laboratorio. Una vez aquí, si no se procesan inmediatamente, se procede a conservarlos congelados hasta el posterior muestreo biométrico.
Se descongelarán las muestras y se realiza un pretratamiento para la obtención de datos biométricos de las muestras: Se miden y pesan individualmente los 50 ejemplares pertenecientes al total de la muestra y correspondientes a todas las clases de tallas existentes en la zona de muestreo.



A partir de aquí se procederá al tratamiento de la muestra.

Es de gran importancia la elección del método de extracción del analito a partir de la matriz. La elección de la técnica de extracción resulta de establecer un compromiso entre la eficacia y la reproducibilidad de la misma, la facilidad del procedimiento (considerando coste y tiempo), el grado de automatización, las medidas de seguridad y el número de muestras que se pueden extraer simultáneamente. La extracción de muestras puede ser de unas concentraciones aproximadas de 2-3 gramos. Por ejemplo si se utilizase el método Soxhlet durante unas 7-8 horas.
Por otro lado, será imprescindible la elección de un disolvente adecuado, siendo en este caso más útiles los disolventes orgánicos (con o sin empleo de calor)